ВЛИЯНИЕ СЕСКВИТЕРПЕНОВОГО Оі-ЛАКТОНА АХИЛЛИНА НА УРОВЕНЬ ЛИПИДОВ И ЭКСПРЕССИЮ мРНК КЛЮЧЕВЫХ ГЕНОВ МЕТАБОЛИЗМА ЛИПИДОВ В КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ ГЕПАТОМЫ ЛИНИИ HTC
Ю.А. Пфаргер1, В.В. Иванов1, А.В. Ратькин1, О.А. Кайдаш1, М.М. Цыганов2,3, В.С. Чучалин1, С.М. Адекенов4, В.В. Новицкий1, Н.В. Рязанцева5
1Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 634050, Томск, ул. Московский тракт, 2
2Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский государственный университет», 634050, Томск, пр. Ленина, 36
3Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Томский научно-исследовательский институт онкологии», 634050, Томск, пер. Кооперативный, 5
4Акционерное общество «Международный научно-производственный холдинг «Фитохимия», Республика Казахстан, г. Караганда, ул. М. Газалиева,4
5Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 660022, Красноярск, ул. Партизана Железняка, 1
Ключевые слова: сесквитерпеновый Оі-лактон ахиллин, гемфиброзил, культура гепатомы линии HTC, МТТ-тест, Nile Red, экспрессия мРНК, гены метаболизма липидов, sesquiterpene Оі-lactone aсhillin, gemfibrozil, hepatoma tissue culture (HTC), MTT assay, Nile Red, mRNA expression, genes of lipid metabolism
Страницы: 5-12
Аннотация
Цель исследования. Изучить влияние сесквитерпенового γ-лактона ахиллина на содержание липидов и экспрессию мРНК ключевых генов метаболизма липидов в клетках гепатомы линии НТС при экспериментальной гиперлипидемии. Материалы и методы. Экспериментальную гиперлипидемию в культуре гепатомы моделировали добавлением в инкубационную среду жировой эмульсии липофундина МСТ/ЛСТ в конечной концентрации 0,05 %. Через 48 ч инкубации клеточной культуры НТС с ахиллином в концентрации 500 мкМ исследовали жизнеспособность клеток с помощью МТТ-теста и оценивали уровень в них общих липидов флуоресцентным методом с витальным красителем Nile Red и содержание триацилглицеролов (ТАГ) и холестерола ферментативным методом. РНК из клеток выделяли с помощью набора Illustra RNAspin Mini RNA Isolation Kit («GE Healthcare»). Уровень экспрессии мРНК ключевых генов метаболизма липидов оценивали при помощи количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени по технологии TaqMan. Результаты. Инкубация клеток с липофундином МСТ/ЛСТ (0,05 %) приводило к увеличению интенсивности флуоресценции Nile Red в клетках и повышению в них уровня ТАГ. Ахиллин в концентрации 500 мкМ не оказывал цитотоксического действия на клеточную культуру НТС и приводил к уменьшению содержания холестерола и ТАГ в клетках при гиперлипидемии индуцированной липофундином. Это сопровождалось снижением интенсивности флуоресценции красителя Nile Red в клетках. В культуре гепатомы ахиллин повышал экспрессию мРНК генов карнитин-пальмитоилтрансферазы 1 ( Cpt1a ) и 2 ( Cpt2 ), 7-альфа-гидроксилазы ( Cyp7a1) и 3-гидрокси-3-метилглутарил КоА редуктазы (Hmgcr ). На экспрессию гена ацилКоА холестерол ацилтрансферазы ( Soat1 ) ахиллин оказывал ингибирующее влияние. Заключение. Снижение содержания холестерола, ТАГ и интенсивности флуоресценции Nile Red в клетках гепатомы при экспериментальной гиперлипидемии под действием ахиллина в концентрации 500 мкМ может быть обусловлено увеличением экспрессии генов карнитин-пальмитоилтрансферазы 1 и 2; 7-альфа-гидроксилазы, что способствует увеличению транспорта жирных кислот в митохондрии и синтезу из холестерола желчных кислот. Наряду с этим, ингибирование гена ацилКоА холестерол ацилтрансферазы способствует уменьшению образования эфиров холестерола и их накоплению в гепатоцитах.
|
